Morfología y respuesta de anticuerpos IgM e IgG anti-Blastocystis sp. en pacientes con síntomas gastrointestinales / Morphology and response of IgM and IgG anti-Blastocystis sp. in patients with gastrointestinal symptoms

Es importante definir criterios diagnósticos que permitan dilucidar el papel patógeno de Blastocystis sp. Se evaluó morfología y se estimó el diámetro de las formas, número de parásitos por campo y por gramo de heces y los anticuerpos IgM e IgG anti- Blastocystis sp. mediante ELISA, en sujetos con sintomatología general y portadores sanos. Se encontró 77% de muestras positivas para Blasctocystis sp, 52% provenientes de pacientes con síntomas como flatulencia 6 (24%), dolor abdominal 5 (20%), náuseas 2 (8%), diarrea 6 (24%) y estreñimiento 6 (24%). Los rangos de parásitos por campo más frecuente en sintomáticos fueron 0-3 (74%) y 10-12 (26%), mientras que 100% de los pacientes asintomáticos presentaron Blastocystis sp. en el rango 0-3. Los pacientes asintomáticos presentaron menor número de parásitos por gramo de heces, en el rango de 0-3 y el rango 7-10 con altas cargas parasitarias solo fue observado en sintomáticos. Se encontró menor cantidad de formas granulares en ambos grupos, en el rango 0-3 en sintomáticos: 85% vacuolares y 15% granulares; 76% vacuolares y 24% granulares, en asintomáticos. En el rango 10-12, 98% vacuolares y 2% de granulares, en sintomáticos. El diámetro promedio de las formas vacuolares fue 11,9±2 μm en los pacientes sintomáticos y 7,9±3,7 μm en asintomáticos. En los granulares fue 9,3±2,3 μm en sintomáticos y 8,2±0,1 μm en asintomáticos. Observándose diferencias significativas entre las formas vacuolares de ambos grupos (P=0,000026), pero no en los granulares (P=0,346). El 3,5% de los pacientes sintomáticos presentaron anticuerpos IgG anti-Blastocystis sp. El estudio morfológico empleado contribuyó en la optimización del diagnóstico, mientras que las técnicas inmunoenzimáticas resultaron de baja sensibilidad.

It is important to define diagnostic criteria to elucidate the pathogenic role of Blastocystis sp. Morphology was assessed and diameter of the shapes, number of parasites per field and per gram of faeces and Blastocystis sp. IgM and IgG antibodies was estimated by ELISA in subjects with constitutional symptoms and healthy carriers. Seventy percent Blasctocystis sp positive samples were found, 52% from patients with symptoms such as flatulence 6 (24%), abdominal pain 5 (20 %), nausea 2 (8%), diarrhea 6 (24%) and constipation 6 (24%). Ranges of parasites per field found more frequently in symptomatic patients were 0-3 (74%) and 10-12 (26%), while 100% of asymptomatic patients had Blastocystis sp. in the range 0-3. Asymptomatic patients showed lower number of parasites per gram feces in the range of 0-3 and the 7-10 range with high parasitic load was only observed in symptomatic. Less granular forms in both groups was found, in the range 0-3 in symptomatic patients: 85% vacuolar and 15% granular; 76% vacuolar and 24% granular in asymptomatics. In the range 10-12, 98% vacuolar and 2% granular in symptomatic patients. The average diameter of the vacuolar forms was 11.9 ± 2 μm in symptomatic patients and 7.9 ± 3.7 μm in asymptomatics . In the granular form was 9.3 ± 2.3 μm in symptomatic and 8.2 ± 0.1 μm in asymptomatics. Significant difference was found among vacuolar forms of both groups (P= 0.000026), but not in the granular form (P= 0.346). Only 3.5 % of symptomatic patients had IgG antibodies to Blastocystis sp. The morphological study employed contributed to the diagnosis optimization while immunoenzymatic techniques were of low sensitivity.

El factor de crecimiento del endotelio vascular hepático en la infección murina por Schistosoma mansoni / The endothelial growth factor vascular infection in murine liver by Schistosoma mansoni

Los antígenos secretados por los huevos de S. mansoni inducen la proliferación de células endoteliales in vivo, así como la producción del Factor de Crecimiento del Endotelio Vascular (VEGF), sugiriendo que la patogénesis en la esquistosomiasis se relaciona con eventos angiogénicos. Se evaluó la expresión del VEGF, como una medida de angiogénesis estimulada por los huevos y los gusanos de S. mansoni, en la infección Bisexual (BIS) y los gusanos adulto (infección UNI) en el hígado de ratones Balb/c, antes y después del tratamiento con PZQ. Los resultados indican que tanto la infección UNI como BIS son capaces de estimular la producción de VEGF en tejido hepático, lo que explica la vascularizacón anómala durante este cuadro infeccioso. Este proceso se acompaña con la presencia de un elevado número de infiltrados leucocitarios en los sitios donde se observa lesión tisular; la producción de VEFG remite tras 48 de tratamiento con PZQ. Estos resultados indican que la producción anómala de VEGF junto con la intensa respuesta pro-inflamatoria asociada no solo a la actividad de VEGF sino también a los infiltrados leucocitarios observados en el tejido hepático, causada tanto por los huevos secretados como por las formas adultas de S. mansoni son los mecanismos que subyacen a las lesiones granulomatosas observadas durante el curso de la esquistosomiasis, pudiendo al menos revertirse el incremento en la vascularización mediante el uso de PZQ.

The antigens secreted by eggs of S. mansoni induce the proliferation of endothelial cells in vivo, as well as the production of Factor Vascular Endothelial Growth factor (VEGF), suggesting that the pathogenesis of schistosomiasis relations with angiogenic events. We evaluated the expression of VEGF, as a measure of angiogenesis stimulated by the eggs and worms S. mansoni in infection bisexual (BIS) and adult worms ( UNI infection ) in the liver of BALB / c mice before and after treatment with PZQ. These results indicate that abnormal production of VEGF with intense pro-inflammatory response not only associated with the activity of VEGF but also leukocyte infiltrates observed in the liver tissue caused by both secreted and eggs by adult forms S. mansoni are the mechanisms underlying granulomatous lesions observed during the course of schistosomiasis, and can be reversed at least the increased vascularization by using PZQ .

Mantenimiento y transporte del Blastocystis sp. en condiciones de vitalidad / Maintenance and transport Blastocystis sp in conditions of vitality

El Blastocystis sp es un protozoario con alta prevalencia en Venezuela. Es controversial por su papel patógeno y su gran variabilidad genética, relacionada con la dificultad de mantenerlo en condiciones de viabilidad fuera del hospedador. Se evaluó la utilidad de los medios de cultivo in vitro RPMI1640, TB1, MBD y MBDM para mantener la viabilidad del Blastocystis sp. Se seleccionaron 97 muestras de heces, 43 (44%) de las cuales resultaron positivas solo para Blastocystis sp y de 15 de ellas se purificaron los Blastocystis sp mediante gradiente (ficol-diatrizaoato de sodio). En cada medio de cultivo y en solución salina 0,85% (SSI) se inoculó1x103 parásitos por paciente y se evaluó la viabilidad mediante coloración con azul de tripano a las 24, 48 y 72 horas. Los resultados mostraron porcentajes de viabilidad a las 24 h: en SSI de 2%, en RPMI1640 5%, en TB1 5%, MBD 24% y MBDM 40%. A las 48 h: en SSI de 3%, en RPMI1640 4%, en TB1 4%, MBD 17% y MBDM 21%. A las 72 h: en SSI 2%, en RPMI1640 2%, en TB1 2%, MBD 15% y MBDM 16%. Se observaron diferencias estadísticamente significativas después de las 24 h, entre los medios TB1, MBD y MBDM comparado con SSI. Se concluye que el medio MBDM es el que ofrece las mejores condiciones para mantener viable a Blastocystis sp por 72 h.

The protozoan Blastocystis sp is a high prevalence in Venezuela. Its role is controversial pathogen and its wide genetic variability related to the difficulty of keeping it in a position outside the host viability. We evaluated the utility of in vitro culture media RPMI1640, TB1, and MBDM MBD to maintain the vitality of Blastocystis sp. They selected 97 stool samples, 43 (44%) of which were positive for Blastocystis sp and only 15 of them were purified by gradient Blastocystis sp (ficoll-sodium diatrizaoato). In each culture medium and 0.85% saline (SSI) is inoculó1x103 parasites per patient and viability was assessed by trypan blue staining after 24, 48 and 72 hours. The results showed viability percentage at 24 hours: in SSI of 2%, 5% RPMI1640 at TB1 5%, 24% and MBDM MBD 40%. After 48 h: SSI 3% in RPMI1640 4%, 4% TB1, MBD MBDM 17% and 21%. After 72 h: SSI 2% in RPMI1640 2%, 2% TB1, MBD 15% and 16% MBDM. Statistically significant differences were observed after 24 h, between TB1 media, compared MBDM MBD and SSI. We conclude that the medium is MBDM which offers the best conditions for maintaining viable Blastocystis sp for 72 h.

Efecto del tratamiento con praziquantel sobre la actividad de la fosfatasa alcalina, fosfatasa acida, superoxido dismutasa en extractos crudos y productos de excreción-secreción de gusanos de Schistosoma mansoni / Effect of Treatment with Praziquantel on the activity of alkaline phosphatase acid phosphatase, superoxide dismutase in Crude Extracts and Excretion-secretion Products of Schistosoma mansoni worms.

Venezuela se encuentra entre los países sudamericanos afectados por la esquistosomiasis y la quimioterapia con praziquantel (PZQ) es la principal estrategia de control. Se determino el efecto cuantitativo del tratamiento con praziquantel sobre la actividad de la Fosfatasa Alcalina (ALP), Fosfatasa Acida (ACP) y Superoxido Dismutasa (SOD), en antígenos solubles (ASG) y productos de excreción-secreción (PESG) de gusanos hembras y machos condición control (ASGHc, ASGMc, PESGHc and PESGMc) o incubados con PZQ in vitro (ASGMpzq, ASGHpzq, PESGMpzq and PESGHpzq). Las proteínas totales se determinaron por colorimetría, la SOD y ACP mediante espectrofotometría y la ALP por fluorometría. Se encontró una mayor concentración de proteínas en las ASG de gusanos no tratados, y en las preparaciones obtenidas luego de la incubación con PZQ in vitro, en los PESG, un incremento en la actividad ACP en los ASG y PESG preparados con gusanos no-tratados, y una disminución de dicha actividad en los ASG y PESG tratados. La SOD, evidenció en los ASG una disminución estadísticamente significativa en los gusanos tratados. La concentración de la ALP disminuyó significativamente en los ASG y PESGH de gusanos tratados en relación a los gusanos no tratados. En conclusión, se observó una disminución en las proteínas totales, actividades enzimáticas ACP y SOD, y concentración de ALP, en ASG y PESG obtenidos con gusanos tratados.

Venezuela is among South American countries affected by schistosomiasis and chemotherapy with praziquantel (PZQ) is the main control strategy. We determined the quantitative effect of treatment with PZQ on alkaline phosphatase activity (ALP), acid phosphatase (ACP) and superoxide dismutase (SOD) in soluble antigens of worms (SWAP) and excretion-secretion products (EEP) of male and female worms (SMWAPc, SFWAPc, ESPWMc and ESPWHc) or incubated with PZQ in vitro (SMWAP PZQ, SFWAP PZQ, ESPWM PZQ and ESPWH PZQ). Total proteins were determined by colorimetry, SOD and ACP by spectrophotometry and fluorometry ALP. There was higher protein concentration in the untreated worms EG, and the preparations obtained after incubation with PZQ in vitro, in the EG, an increase in ACP activity in the EG and PG prepared with non-treated worms and a decrease of such activity on the EG and treated PG. On the other hand, SOD activity, the EG showed statistical significance in the treated worms. In the PG showed the same behavior, but those differences were not statistically significant. Similarly, there was a decrease in the concentration of ALP noticeable in the EG and worm PGh treated worms relative to untreated statistically significant. In conclusion, we observed a decrease in total protein, ACP and SOD enzyme activities and concentration of ALP, and EG in PG treated worms.

Tipos morfológicos, número de parásitos por campo y carga parasitaria de Blastocystis sp proveniente de pacientes sintomáticos y asintomáticos

El papel patógeno de Blastocystis sp es controversial, por lo que es importante definir criterios diagnósticos que permitan dilucidar tal rol. Se evaluó la morfología de Blastocystis sp, número de parásitos por campo y por gramo de heces, en sujetos con sintomatología general y portadores sanos. El estudio fue descriptivo y el diseño no-experimental. La observación y contaje al microscopio se hizo en diez campos consecutivos de 40X y en relación al peso de las heces en gramos, en parásitos teñidos con lugol. Se encontró 77% de muestras positivas para Blastocystis sp, 52% provenientes de pacientes con síntomas como flatulencia 6 (24%), dolor abdominal 5 (20%), náuseas 2 (8 %), diarrea 6 (24%) y estreñimiento 6 (24%). Los rangos de parásitos por campo más frecuente en sintomáticos fueron 0-3 (74%) y 10-12 (26%), mientras que 100% de los pacientes asintomáticos presentaron Blastocystis sp en el rango 0-3. Los pacientes asintomáticos presentaron menor número de parásitos por gramo de heces, en el rango de 0-3 y el rango 7-10 con altas cargas parasitarias sólo fue observado en sintomáticos. Se encontró menor cantidad de formas granulares en ambos grupos, en el rango 0-3 en sintomáticos: 85% vacuolares y 15% granulares; 76% vacuolares y 24% granulares, en asintomáticos. En el rango 10-12, 98% vacuolares y 2% de granulares, en sintomáticos. En conclusión, el estudio de las morfologías, el reporte de la cuantificación diferencial de formas por campo y la cuantificación del número de parásitos por campo pueden contribuir a optimizar el diagnóstico y el manejo quimioterapeútico del paciente.

Morphological types, number of parasites per field and parasite load of Blastocystis sp from symptomatic and asymptomatic patients The pathogenicity of Blastocystis sp is controversial, therefore, it is important to define diagnostic criteria for its determination. We evaluated the morphology of Blastocystis sp, number of parasites per field and per gram of faeces in patients with general symptoms and in healthy carriers. The study was a descriptive and nonexperimental design. The microscopic observation and counting was done in ten consecutive fields in relation to 40X and stool weight in grams. We found 77% of samples positive for Blastocystis sp, 52% from patients with symptoms such as flatulence 6 (24%), abdominal pain 5 (20%), nausea 2 (8 %), diarrhea 6 (24%) and constipation 6 (24%) . The ranges of parasites per field more frequent in symptomatic patients were 0-3 (74%) and 7-10 (26%); and in the asymptomatic group 100% of the patients were in the 0-3 range. In the 0-3 range asymptomatic patients had a lower number of parasites per gram of feces, while in the 7-10 range high parasite loads were observed only in symptomatic patients. Less granular forms in relation to vacuolar ones were found in both groups, in the 0-3 range of the symptomatic group, 85% vacuolar and 15% granular, and 76% vacuolar, and 24% granular in the asymptomatic. In conclusion, the study of the morphologies, the quantification of differential forms by field and the quantification of the number of parasites per field contributes to the technical optimization of routine coproparasitology.

Infección experimental de aislados humanos de Blastocystis sp. en ratones inmunosuprimidos con dexamentasona / Experimental infection using human isolates of Blastocystis sp. in dexamethasone immunosurpressed mice

Blastocystis sp. es un protozoario controversial en cuanto a su papel patogénico, asociado a enfermedad gastrointestinal, con alta prevalencia. A fin de evaluar signos, síntomas y hallazgos de laboratorio producidos por Blastocystis sp., ratones inmunosuprimidos con dexametasona fueron infectados con morfologías del parásito obtenidos de pacientes sintomáticos y asintomáticos. Los parásitos se aislaron empleando gradiente de densidad con lymphoprep™, se realizó semicuantificación de las morfologías presentes en las muestra de heces, y se inocularon 1,6 × 105 parásitos en ratones Balb/c, vía intragástrica. En heces de pacientes sintomáticos se encontraron seis veces más vacuolares que granulares, mientras que en asintomáticos la relación fue apenas dos veces mayor. Los síntomas más frecuentes en los pacientes fueron: flatulencia (85%), dolor de cabeza(62%), dolor abdominal (55%), fiebre (30%) y estreñimiento (8%). La semicuantificación de parásitos por campo en humanos no encontró relación directa entre carga parasitaria y sintomatología gastrointestinal, mientras que en la cuantificación de parásitos por gramo de heces si existió. Los ratones presentaron signos variables luego de la infección, todos aquellos infectados con muestras de pacientes sintomáticos presentaron signos, mientras que solo algunos de los infectados con muestras de pacientes asintomáticos los desarrollaron. Se demostró que no existe relación estadísticamente significativa (p= 0,8) entre la morfología del parásito y los signos manifestados por el ratón; sin embargo hubo una relación estadísticamente significativa (p=0,02) entre las formas vacuolares del parásito y la aparición de síntomas en los pacientes. Se concluye que Blastocystis sp. tiene capacidad de producir signos sugestivos de patología en ratones.

Blastocystis sp. is a controversial protozoan in terms of its pathogenic role associated with high-prevalence gastrointestinal disease. To evaluate signs, symptoms and laboratory findings produced by Blastocystis sp., dexamethasone immunosuppressed mice were infected with parasite morphologies obtained from symptomatic and asymptomatic patients. The parasites were isolated using density gradient with lymphoprep™, semi-quantification of the morphologies present in the stool sample was performed and 1.6 × 105 parasites were inoculated into Balb/c mice, intragastrically. In the faeces of symptomatic patients, vacuolar morphology was six times greater than granular morphology, whereas the ratio in asymptomatic patients was only two times greater. The most common symptoms in patients were flatulence (85%), headache (62%), abdominal pain (55%), fever (30%) and constipation (8%). The semi-quantification of parasites per field in humans evidenced no direct relationship between parasite burden and gastrointestinal symptoms, while in parasite quantification per gram of feces, a direct relationship was found. The mice showed variable signs after infection; all those infected with samples from symptomatic patients showed signs, while only some of those infected with samples from asymptomatic patients developed them. It was demonstrated that no statistically significant (p = 0.8) relationship exists between the morphology of the parasite and the signs manifested by the mouse; nevertheless, there was a statistically significant (p = 0.02) relationship between the vacuolar forms of the parasite and onset of symptoms in patients. Conclusions are that Blastocystis sp. is capable of producing signs suggestive of pathology in mice.

Frecuencia de la mutación del factor V Leiden y protrombina G20210A en pacientes con tromboembolismo venoso / Factor V Leiden and prothrombin G20210A mutations in adults with a history of venous thomboembolism

El factor V Leiden y protrombina G20210A son factores de riesgo clínico de trombosis venosa. El objetivo de este estudio fue comparar la frecuencia simple o combinada de mutaciones en el factor V (Leiden) y protrombina (G20210A) en 140 sujetos de la ciudad de Valencia-Venezuela. El primer grupo pacientes (G-I) consistió en 45 referidos por un centro cardiológico con historia de hipertensión e isquemia miocárdica, el segundo grupo paciente (G-II) fueron 44 con historias de trombosis venosa y el grupo control (G-III) 51 personas saludables. Las muestras de sangre fueron analizadas mediante reacciones específicas en cadena de polimerasa y digestión con enzimas de restricción. La presencia de factor V Leiden en G-I fue 6,6 por ciento, 2,2 por ciento homocigotas (p = 0,6627), y 6,7 por ciento heterocigotas para protrombina G20210A (p = 0,0993), mientras que en G-II, 18,2 por ciento fueron portadores del factor V Leiden (p = 0,0407) y 2,3 por ciento para protrombina G20210A, todos heterocigotas (p = 0,4632). No fueron detectados portadores de mutación de la protrombina G20210A en G-III, pero 3,9 por ciento fue heterocigota para el factor V Leiden. Los resultados muestran que el factor V Leiden es más frecuente en los pacientes con historia de trombosis venosa, sugestivo de potencial factor de riesgo, y que no parece existir asociación entre la mutación de la protrombina G20210A con las condiciones clínicas evaluadas

Schistosoma mansoni: respuesta celular hepática de ratones Balb/c infectados unisexualmente / Schistosoma mansoni: hepatic cellular response of unisexually-infected Balb/c mice

La respuesta granolomatosa en animales infectados con Schistosoma mansoni es atribuida a la presencia del huevo y aunque los gusanos adultos co-existentes en el sistema porta hepático, el papel en la inmunopatología no está claro. Se evaluó la respuesta celular hepática en ratones Balb/c infectados unisexualmente (UNI) con cercarias de S. mansoni, mediante histología convencional, inmunofluorescencia para CD4+ y CD8+, inmunohistoquímica e inmunomicroscopía electrónica para macrófagos activados. Los resultados muestran que la infección UNI produjo un infiltrado hepático con un área de 33,9 ± 18,86 µm² (media ± ME), constituido por macrófagos, linfocitos, plasmocitos y escasos eosinófilos. En la infección bisexual, la composición celular fue similar pero más intensa con un área de 195,6 ± 74,4 µm². Las células CD4+ y CD8+ en el hígado se ubicaron entre 2 y 4 cel/ µm² cerca del gusano y distante en forma difusa o en grupos, en ambas condiciones de infección. Los macrófagos activados se ubicaron alrededor de los gusanos y en donde se deposita el pigmento esquistosiomal. Los resultados sugieren que el gusano adulto es capaz de inducir una respuesta inflamatoria hepática en ausencia del huevo, la cual debe jugar un papel importante en la respuesta producida contra el huevo y tienen implicaciones en la patogénesis de la esquistosomiasis murina

Cryptosporidium: diagnóstico y prevalencia en niños sanos del estado Carabobo Venezuela / Cryptosporidium: diagnosis and prevalence in healthy children from Carabobo state Venezuela

Se estudió la prevalencia de Cryptosporidium en 260 muestras fecales de niños aparentemente sanos (1-10 años) en Valencia, estado Carabobo, Venezuela. En 128 muestras formadas-frescas se investigaron protozoarios intestinales por análisis microscópico al fresco y ooquistes en extendidos teñidos con Kinyoun, y en 132 muestras preservadas en formalina al 10 por ciento se investigó Cryptosporidium. Las muestras formadas (n= 100) fueron concentradas en formalina-acetato de etilio y coloreadas. Las muestras líquidas (n=32) sólo fueron coloreadas. Antígenos fecales de ooquistes fueron determinados por ELISA (World Diagnostic). La prevalencia de Cryptosporidium, según la muestra, fue de 0,8 por ciento en formadas-frescas, 8 por ciento en formadas-preservadas y 12,5 por ciento en líquidas- preservadas. Otros protozoarios fueron identificados en heces formadas-frescas, Blastocystis hominis (23,4 por ciento), Giardia lamblia (14,1 por ciento), Endolimax nana (10,9 por ciento) y Entamoeba coli (3,1 por ciento). La captura de antígenos fecales mostró, respecto al coprodiagnóstico 93,3 por ciento de especificidad y 66,7 por ciento de sensibilidad en 32 muestras líquidas, y 89,3 por ciento de especificidad y 53,3 por ciento de sensibilidad en 58 heces formadas. Los resultados muestran por primera vez una prevalencia de criptosporidiosis importante en la población infantil del estado Carabobo, de clase socio-económica baja, presentando o no diarrea. Se corrobora que la forma clásica de análisis de heces es ineficiente para detectar Cryptosporidium. Se demuestra poca confiabilidad diagnóstica del método de captura de antígenos fecales. Se recomienda el uso rutinario de concentración y coloración de heces en el diagnóstico de laboratorio por ser el más económico y simple

Shistosoma mansoni: cambios ultraestructurales durante la transformación del miracidio in vitro / Shistosoma mansoni: ultrastructural changes during in vitro transformation of miracidia

Se evaluaron los cambios morfológicos y ultraestructurales de la transformación in vitro de miracidios (M) de Schistosoma mansoni aislado Puerto Rico (PR), incubados en RPMI-1640 por 30 min para su transformación a esporoquiste madre (EM), seguido de 16 h en medio Hansen. Se determinó la viabilidad por la integridad del sistema protonefrigial y la exclusión del azul tripano; el tamaño y la morfología se evaluó mediante microscopía de luz y electrónica de transmisión. La microscopía de luz mostró a los 30 min pérdida del movimiento y desprendimiento del epitelio ciliado. Posteriormente los esporoquistes se observan extendidos con movimientos vermiformes y las células con flama activas: con una viabilidad de 76 por ciento a los 5 días y 50 por ciento al día 11 de cultivo, aumentando su tamaño 3 veces (300 µm) para el día 16. La microscopía electrónica reveló a 24 h de cultivo cambios en composición y distribución del tegumento, observándose polisomas libres y microvellocidades en la capa externa del tegumento, al día 7 la membrana externa de EM se muestra delgada con bolsas germinativas en su interior u gránulos proteicos electrón densos. El sistema protonefrigial está intacto a las 24 h de cultivo, observándose células en flama con 11 pares de microtúbulos periféricos. Se concluye que la transformación in vitro del M en medio axénico se acompaña de cambios importantes en la superficie del tegumento y cambios ultraestructurales

Ultrastructural study of the in vitro interaction between Biomphalaria glabrata hemocytes and Schistosoma mansoni miracidia

Biomphalaria glabrata and Schistosoma mansoni relationship was studied by light microscopy (LM) and freeze-fracture replica technique (FFR). We observed very thin cytoplasmic extensions of hemocytes in the LM, which then surround immobilize the miracidia. FFR images showed that the contact site between hemocytes cytoplasmic extensions and the external tegumentary coat involved only superficial layers of miracidia. Numerous vacuoles and filopodia were observed in the hemocyte cytoplasm, the latter binding with those from neighboring cells. In spite of the close interfilopodia contact, no cellular junctions were seen at these sites nor between filopodia-miracidia contact areas. The observed migration of hemocytes and their disposition in layers surrounding the miracidia in vitro correspond to previous studies.

Schistosoma mansoni: transformación de miracidio en su huésped natural y en cultivo / Schistosoma mansoni: miracidia transformation in natural host and culture

Los cambios evolutivos de miracidio a cercaria en Schistosoma mansoni est n asociados a una ¡ntima relación con los tejidos blandos del molusco hospedador intermediario. En el presente trabajo, se evalúa la transformación morfo-antigénica de miracidios en la condición de infección natural bajo tres esquemas de mantenimiento in vitro, sobre una monocapa o en sobrenadante de células Vero y en el medio de Chernin. Los resultados muestran una asincron¡a en la evolución de esporoquistes en la condición natural. En medios axénicos o celulares se apreció una pérdida de cilios, cambios en la morfología miracidial, modificaciones en la cubierta externa y presencia de células germinales. Estos cambios ocurrieron en los primeros 6 días de incubación y la viabilidad e infectividad para caracoles por más de 30 días. El polimorfismo de los esporoquistes de cultivos fue similar a los observados en la condición natural. El análisis de los cambios antigénicos en el proceso de transformación, mediante RIAF, muestra alta reactividad del suero anti-miracidio con esporoquiste de 1 a 48 h en medio axénico, que declina y desaparece en esporoquistes de 72 h y 8 días, respectivamente. La reactividad con suero anti-cercaria fue alta con esporoquistes de 8 días y negativa con esporoquiste de 48 h. Los resultados sugieren que los cambios morfológicos y las modificaciones antigénicas ocurren concomitantemente, lo cual puede ser un indicador de transformación en los estudios de morfogénesis de S. mansoni in vitro

Field evaluation of a diagnostic protocol for Chagas' disease and rangeliosis

The present paper evaluates the protocol for the diagnosis of Chagas' diseases and rangeliosis that is suitable for use in remote and scarcely populated rural areas. Beginning with a blood sample taken by venipuncture in the rural dispensary from 350 inhabitants of Caser­o La Sierra, Cojedes State, Venezuela, samples were analyzed at a laboratory located at a distance of 150 Km. Each blood sample was analyzed for blood and clot culture, artificial xenodiagnosis, inoculation into mice, complement fixation reaction (CFR), and indirect fluorescent antibodies test (IFA). Nine isolates of trypanosomes were obtained and identified as Trypanosoma rangeli, 29.4 percent of the blood samples showed seropositivity for Trypanosoma cruzi, 7.1 percent of total of persons between 6 and 18 years were found infected with T. rangeli, suggesting active transmission of this trypanosome in an endemic area for Chagas' disease. Results indicate that this protocol of study is reliable, economical and sufficiently versatile to study both rangeliosis and Chagas' disease

Trypanosoma cruzi: metacyclogenesis in vitro - I. Changes in the properties of metacyclic trypomastigotes maintained in the laboratory by different methods

In this work we have studied the modifications in the biological properties of Trypanosoma cruzi when the parasite is maintained for a long time in axenic culture. The studies were done with a clone from an avirulent strain (Dm30L) and a non-cloned virulent strain (EP) of T. cruzi. Both parasiteswere maintained, for at least three years, by successive triatomine/mouse alternate passage (control condition), or by serial passage in axenic medium (culture condition), or only in the mouse (mouse condition). The comparison between parasites of culture and control condition showed that metacyclogenesis capacity was reduced in the former and that the resulting metacyclics displayed an attenuatedvirulence. In order to compare the virulence of metacyclics from the urine of the insect vector, Rhodnius prolixus were infected by artificial feeding with parasites of the control or culture condition. After three triatomine/triatomine passages, there was observed an almost identical biological behavior for these parasites, hence indicating that the maintenance of T. cruzi for a long time in axenic culture affects the differentiation capacity and the virulence of the parasite. Additionally, it was demonstrated that it is possible to maintain T. cruzi exclusively through passages in the invertebrate host

Biological properties of Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes: usefulness for studying Chagas' disease (brief report)

We have investigated changes in the biological properties of metacyclic trypomastigotes obtained from various sources, kept in the laboratory under diverse conditions and subjected to different procedures. Results demonstrate the great capacity of adaptation of Trypanosoma cruzi to changeable environments. The usefulness of different chemically defined media and consecutive passages through various hosts emphasize the importance of mimicking the life cycle of the parasite

Suppressed induction and expression of delayed hypersensitivity responses in BALB/c mice infected with trypanosoma venezuelense

Following inoculation with 1x10E4 trypomastigotes of Trypanosome venezuelense BALB/c mice showed a progressive, fatal parasitemia and an impaired capability to develop delayed hypersensitivity responses (DHR) as induced by IV immunization with sheep red blood cells (SRBC). Depressed DHR were seen in mice immunized at the time of inoculation and challenged 4 days later. A local cell transfer of immune cells at the site of challenge in the footpad showed that T cells obtained from infected mice immunized with an optimal dose of SRBC on the day of inoculation failed to transfer DHR to naive recipients. However, significant DHR were transfered by T cells from infected mice immunized with a sub-optimal dose of SRBC. By the other hand, 4 days-infected- mice receiving a local transfer of immune T cells taken from non-infected donors failed to express DHR ascompared to controls. It is suggested that in BALB/c mice infected with T. venezuelense both the induction and expression of DHR are impared